Efeito do citrato e taurina em meio CR2aa no desenvolvimento de embriões bovinos fecundados in vitro / Effect of citrate and taurine added to CR2aa medium on the development of in vitro-fertilized bovine embryos

Avaliou-se o efeito do citrato em meio CR2aa suplementado com soro fetal bovino (SFB) ou livre de proteínas séricas e sua associação com taurina no desenvolvimento de embriões bovinos fecundados in vitro. Embriões foram cultivados em CR2aa contendo 0, 0,5, 1,0 e 3,0mM citrato, suplementado com 10 por cento SFB (experimento 1) ou com álcool polivinil (PVA; experimento 2). No terceiro experimento, embriões foram cultivados em meio com 0,5mM citrato, ou 7mM taurina, ou com a associação de ambos, suplementado com SFB. Os cultivos foram realizados com células do cumulus em ambiente a 38,8ºC com 5 por cento de CO2 em ar atmosférico. Melhora no desenvolvimento embrionário foi observado no cultivo de embriões em CR2aa com 0,5 e 1,0mM citrato na ausência de SFB (P<0,05), 8,6 por cento e 11,3 por cento de blastocistos, respectivamente, porém com valores mais baixos (P<0,05) que embriões cultivados em CR2aa com SFB (31,9 por cento). Associação de citrato com taurina em meio com SFB não influenciou (P>0,05) a produção de embriões ou o número de células. Citrato em meio CR2aa pode ser uma alternativa para cultivo embrionário em condições atmosféricas com 5 por cento de CO2 em ar na ausência de proteína sérica.

The effect of citrate added to CR2aa medium supplemented with fetal calf serum (FCS) or serum-proteinfree and its association with taurine on the development of in vitro-fertilized bovine embryos was evaluated. Embryos were cultured with 0, 0.5, 1.0, and 3.0mM citrate, in CR2aa supplemented with 10 percent FCS (experiment 1), or polyvinyl alcohol (PVA; experiment 2). In experiment 3, embryos were cultured with 0.5mM citrate, 7.0mM taurine or with association of both, in medium supplemented with FCS. Embryo culture was performed with cumulus cells at 38.8ºC in 5 percent CO2 under air for all experiments. Positive effect on embryo development was only observed with 0.5 and 1.0mM citrate in FCS-free CR2aa (P<0.05; 8.6 percent and 11.3 percent blastocyst, respectively), however with lower embryo rate than CR2aa with FCS (31.9 percent). Association between citrate and taurine in medium supplemented with FCS did not affect (P>0.05) embryo rate nor total cell number. Citrate in CR2aa medium can be an alternative for serumfree embryo culture under 5 percent CO2 in air, absence of serum protein.

Effect of maternal heat-stress on follicular growth and oocyte competence in Bos indicus cattle.

The objective was to determine whether exposure of Gir (Bos indicus) cows to heat-stress (HS) causes immediate and delayed deleterious effect on follicular dynamics, hormonal profile and oocyte competence. The cows were kept in tie-stalls for an adaptive thermoneutral period of 28 days (Phase I, Days -28 to -1). In Phase II (Days 0-28) cows were randomly allocated into control (CG, n=5) and HS (HS, n=5) treatments. The HS cows were placed in an environmental chamber at 38 degrees C and 80% relative humidity (RH) during the day and 30 degrees C, 80% RH during the night for 28 days. The CG group was maintained in shaded tie-stalls (ambient temperature) for 28 days. During Phase III (Days 28-147) animals were placed in tie-stalls (Days 28-42) followed by pasture (Days 42-147) under thermoneutrality. In each phase, weekly ovum pick up (OPU) sessions were to evaluate follicular development, morphology of cumulus-oocyte complexes (COCs), and developmental competence after in vitro maturation, fertilization, and culture. Serum concentrations of progesterone (P(4)) and cortisol were evaluated by radioimmunoassay. Exposure of Gir cows to HS had no immediate effect on reproductive function, but exerted a delayed deleterious effect on ovarian follicular growth, hormone concentrations, and oocyte competence. Heat-stress increased the diameter of the first and second largest follicles from Days 28 to 49. Indeed, HS increased the number of >9 mm follicles (characterized as follicular codominance) during this phase. Cows exposed to HS had longer periods of non-cyclic activity (P(4)<1 ng/mL), as well as shorter estrous cycles. However, HS did not affect cortisol concentration as compared to CG. Although HS had no significant effect on cleavage rate, it reduced blastocyst development during Phase III. In conclusion, long-term exposure of B. indicus cattle to HS had a delayed deleterious effect on ovarian follicular dynamics and oocyte competence.

Avaliação ultra-sonográfica da dinâmica folicular e lútea em vacas da raça Guzerá / Ultrasonographic evaluation of follicular dynamics and luteal function in Guzerá cows

Caracterizaram-se o padrão de crescimento folicular e a função lútea ao longo do ciclo estral em vacas da raça Guzerá (n=5), multíparas, não-lactantes. Os animais utilizados apresentavam idade e condição corporal semelhantes e peso corporal médio de 518± 48.5kg. A dinâmica folicular foi monitorada diariamente a partir do dia da ovulação, durante dois ciclos consecutivos, utilizando-se um aparelho de ultra-sonografia equipado com uma probe linear retal de 5MHz. Amostras de sangue foram coletadas a cada 48h, a partir do momento da ovulação, durante os dois ciclos. O primeiro ciclo foi sincronizado pela administração de um luteolítico (cloprostenol), e o segundo foi natural. Os folículos foram identificados e mensurados; e os dados obtidos, registrados em função do dia do ciclo. O comprimento do ciclo estral foi de 19,10± 1,86 dias. Observou-se maior incidência de ciclos com três ondas de crescimento folicular (50 por cento), mas ciclos com duas (37,5 por cento) ou quatro ondas (12,5 por cento) também foram identificados. O diâmetro máximo dos folículos dominantes não ovulatórios foi de 11,60± 2,37 mm, e dos folículos ovulatórios de 14,4± 0,5 mm. A taxa de crescimento dos folículos dominantes da primeira, segunda, terceira e quarta onda foi de 1,48± 0,60; 0,81± 0,13; 1,10± 0,27 e 1,33mm/dia, respectivamente. A concentração máxima de progesterona no diestro foi de 5,50± 0,92ng/ml. A raça Guzerá apresenta características da dinâmica folicular semelhantes àquelas observadas em outras raças zebuínas, como a tendência ao maior número de ondas de crescimento associadas à menor taxa de crescimento, diâmetro máximo e persistência dos folículos dominantes das ondas intermediárias

The follicular growth pattern and luteal function during the estrous cycle were studied using multiparous, non-lactating Guzerá cows (n=5). The animals presented similar age, body score condition, and mean body weight of 518 ± 48.5kg. Follicular dynamics was daily monitored between ovulations during two consecutive estrous cycles, using an ultrasound device equipped with a linear rectal 5MHz transducer. Blood samples were collected each 48h after ovulation, during the evaluated cycles. The first cycle was synchronized using a luteolytic agent (cloprostenol), and the second estrous cycle was natural. Follicles were identified and measured, and data were individually recorded according to the day of the cycle. The mean length of the cycles was 19.10 ± 1.86 days. There was a higher incidence of cycles presenting three follicular growth waves (50 percent), but cycles presenting two (37.5 percent) or three (12.5 percent) waves were also observed. The maximum diameter of non-ovulatory follicles was 11.60± 2.37mm, and that of ovulatory follicles was 14.40± 0.50mm. The growth rate of dominant follicles during the first, second, third and fourth waves were 1.48 ± 0.60; 0.81 ± 0.13; 1.10 ± 0.27 and 1.33mm/day, respectively. Progesterone maximum concentration during diestrus was 5.50± 0.92ng/ml. These results show that the Guzera breed presents characteristics of the follicular dynamics similar to those observed in other Zebu breeds, like the trend to a higher number of follicular waves associated with lower growth rate, maximum diameter and persistence of the dominant follicles emerging during non-ovulatory waves

Developmental competence and expression of the Hsp 70.1 gene in oocytes obtained from Bos indicus and Bos taurus dairy cows in a tropical environment.

Bos indicus cows usually have better reproductive performance in tropical and subtropical regions than Bos taurus cows, presumably due to their better adaptation to tropical environments. The aim of this study was to evaluate the developmental competence and expression of the Hsp 70.1 gene in immature oocytes from B. taurus (Holstein) and B. indicus (Gyr) dairy cows raised in a tropical region. Cumulus-oocyte complexes were obtained by transvaginal ultrasound-guided follicle aspiration between spring and early autumn, and subjected to in vitro maturation and fertilization. Presumptive zygotes were co-cultured with their own cumulus cells in CR2aa media with 10% fetal calf serum; Grade 1 blastocysts were transferred to synchronized crossbred recipients. The total RNA was extracted from immature Holstein and Gyr oocytes (three pools for each breed) and relative quantification of the Hsp 70.1 transcripts was performed by real time PCR after reverse transcription. Cleavage and blastocyst rates were greater (P<0.05) for Gyr (n=390 oocytes) than Holstein (n=505) breed (66.7% versus 53.1% of cleavage and 19.6% versus 10.8% of blastocysts, respectively), but pregnancy rates were not significantly different following transfer to recipients (44.5% for 36 Gyr embryos; 60% for 10 Holstein embryos). Holstein immature oocytes had a higher level (P<0.05) of Hsp 70.1 relative expression (1.82+/-0.22; mean+/-S.E.M.) than Gyr oocytes (1.12+/-0.11). In conclusion, Gyr oocytes obtained in a tropical region were less subject to stress and more likely to develop (after IVF) than Holstein oocytes.

Características andrológicas de touros da raça Gir / Andrological characteristics of Gyr (bos indicus) bulls

Determinaram-se as características andrológicas de touros da raça Gir, classificando-os quanto ao seu potencial reprodutivo, utilizando-se o sistema de classificação andrológica por pontos (CAP). Os animais foram separados em três grupos: G1= animais de 18-24 meses (n=33), G2 = 25-31 meses (n=24) e G3 = 32-38 meses (n=12). A média da circunferência escrotal no G1 foi menor (P<0,05) do que nos G2 e G3. A motilidade ( por cento) e o vigor não diferiram entre os grupos. As taxas ( por cento) de defeitos maiores e totais foram maiores (P<0,05) no G1 do que nos G2 e G3. Para as características andrológicas não houve diferenças entre G2 e G3. Com relação ao CAP, G1, G2 e G3 apresentaram, respectivamente, 25,7 por cento, 58,3 por cento e 61,5 por cento de animais aptos à reprodução; 11,4 por cento, 20,8 por cento e 15,4 por cento questionáveis e 57,1 por cento, 12,5 por cento e 15,4 por cento inaptos ou imaturos. A idade dos touros Gir influenciou a circunferência escrotal e os defeitos maiores e totais, mas não a motilidade e o vigor. Maior proporção de animais aptos à reprodução ocorreu após 24 meses de idade.

Gyr bulls were ranked regarding their reproductive potential, following evaluations through the score-based andrological classification system (ACP). For the examinations, three animal age groups were considered: 18 to 24 month-old (G1, n=33), 25 to 31 month-old (G2, n=24), and 32 to 38 month-old (G3, n=12). Scrotal circumference was lower in G1, as compared to G2 and G3 (P<0.05). Percent motility and vigor were not affected by the age groups. Percent rates of major and total defects were higher (P<0.05) in G1 than in G2 or G3. No significant differences were observed when G2 and G3 were compared. Regarding ACP data, G1, G2 and G3 yielded, respectively, 25.7, 58.3 and 61.5 percent of adequate breeders; 11.4, 20.8 and 15.4 percent of bulls with undefined breeding capacity, and 57.1, 12.5 and 15.4 percent of inapt breeders or immature animals. Age group affected scrotal circumference and major and total defects, but did not influence motility or vigor. The highest proportion of adequate breeders was obtained with 24-month-old bulls and older.

Protocolos de produção in vitro de embriões na raça Gir / In vitro embryo production protocols in Gir breed

Avaliaram-se os efeitos de dois protocolos de punção folicular na quantidade/qualidade dos oócitos e na produção in vitro de embriões, em vacas da raça Gir, não-lactantes. O ciclo estral foi sincronizado com cloprostenol e ao longo do experimento os animais receberam implantes auriculares de norgestomet, renovados a cada 14 dias. Os animais foram submetidos aos protocolos I (sem estimulação hormonal, com punção folicular duas vezes/semana) e II (pré-tratamento com 250 UI de FSH em doses decrescentes, três dias antes da punção folicular). Os oócitos recuperados foram levados ao laboratório em meio TALP-Hepes e submetidos à maturação. Na fecundação in vitro utilizou-se sêmen de touro Gir, previamente capacitado. Após 22 horas de fecundação, os prováveis zigotos foram co-cultivados com células da granulosa em CR2aa acrescido de 10 por cento de soro fetal bovino. A taxa de clivagem foi avaliada 72 horas pós-fecundação e a de blastocisto 192 horas pós-fecundação. O número total de folículos foi maior (P<0,05) no protocolo II, assim como o número de folículos grandes e médios (P<0,05) e o diâmetro do maior folículo (P<0,05), sendo o número de folículos pequenos (P<0,05) menor. O total de oócitos recuperados por sessão não foi diferente entre os protocolos I e II (P>0,05). O número de oócitos de grau I e a taxa de clivagem foram maiores (P<0,05) e o número de degenerados menor protocolo II. A pré-estimulação ovariana com FSH pode melhorar a qualidade e a taxa de clivagem dos oócitos recuperados por punção folicular em animais Gir.

The effect of two ovum pick-up protocols on amount/quality of oocytes retrived and on in vitro embryo production of Gyr cows was evaluated in non-lactating cycling cows with good body and reproductive conditions. Estrous cycles were synchronized with cloprostenol. During the experiment, animals received norgestomet ear implants, replaced every 14 days. Animals were submitted to protocol I (without hormonal estimulation) and protocol II (pre-stimulation with 250 IU of FSH three days before aspiration). Recovered oocytes were transported in Talp-Hepes to the laboratory, classified and maturated. Twenty two hours after fertilization, presumptive zygotes were co-culture with granulosa cells in CR2aa supplemented with 10 percent of fetal calf serum. Cleavage rate was assessed at 72 hours post-fertilization, and blastocyst production 192 hours post-fertilization. The total number of follicles, the number of large and medium follicles and the diameter of the largest follicle were higher (P<0.05) in protocol II, and the number of small follicles (P<0.05) was lower than in protocol I. No difference between protocols I and II was observed for oocytes recovered per aspiration section (P>0.05). The number of grade I oocytes and cleavage rate were higher (P<0.05) in protocol II and the number of degenerated oocytes was lower (P<0.05). The pre-stimulation with FSH can improve the quality and cleavage rate of oocytes recovered by ovum pick-up in zebu animals.

Concentração espermática e tempo de incubação na fecundação in vitro usando-se sêmen de touros da raça Guzerá / Sperm concentration and incubation period on in vitro fecundation using sperm of Guzera bulls

Estudou-se o efeito da concentração espermática e período de incubação e da interação dessas características sobre a fecundação in vitro (FIV) usando-se sêmen de touros Guzerá. Oócitos (n=1146) maturados in vitro foram divididos em tratamentos objetivando a FIV, em esquema fatorial 3×2×2 (três touros - A, B e C, duas concentrações espermáticas - 2 e 4×10(6) espermatozóides/ml e dois tempos de incubação 12 e 18 horas). Utilizaram-se espermatozóides viáveis obtidos por swin-up. A FIV foi realizada em meio fert-talp com heparina, em incubadora com 5 por cento de CO2 e 95 por cento de umidade, a 38,5°C. Após incubação, 50 por cento dos oócitos foram fixados e corados para determinação das taxas de penetração, fecundação monoespermática e poliespermia. O restante foi co-cultivado com células da granulosa em meio CR2aa por oito dias, avaliando-se a taxa de clivagem e a produção de blastocisto. Houve maior taxa de penetração (P<0,05) na concentração de 4×10(6) espermatozóides/ml por 18 horas (64 por cento), e não se observou diferença (P>0,05) entre os demais tratamentos. A taxa de poliespermia foi maior (P<0,05) na concentração espermática de 4×10(6), independente do tempo de incubação. Na concentração espermática mais alta, a taxa de poliespermia foi maior no tempo de incubação de 18 horas (P<0,05). O touro A apresentou menor (P<0,05) taxa de poliespermia em relação aos demais. Ainda, no touro A a taxa de clivagem foi maior (P<0,05) que no touro B, enquanto o C mostrou-se semelhante tanto ao A quanto ao B. O tempo de incubação, a concentração espermática e a interação das variáveis influenciaram as taxas de penetração e poliespermia, sem interferir na taxa de fecundação monoespermática e na produção de blastocistos.

The effects of sperm concentration, incubation period and their interaction on in vitro fertilization (IVF) using sperm of Guzera bulls were evaluated. In vitro matured oocytes (n=1146) were allotted to IVF treatments in a factorial scheme 3×2×2 - three bulls (A, B and C), two sperm concentrations (2 and 4×10(6) spermatozoa/ml) and two incubation periods (12 and 18h). Viable spermatozoa were obtained by swim-up. The IVF was performed using in Fert-Talp medium with heparin, on incubator with 5 percent CO2 and 95 percent humidity, at 38.5°C. After the incubation, 50 percent of oocytes were fixed and stained to determine penetration, monospermic fecundation and polyspermy rates. The remainder was co-cultured with granulosa cells in CR2 medium for eight days to evaluate cleavage and embryo production rates. The penetration rate was higher (P<0.05) for sperm concentration of 4×10(6) spermatozoa/ml incubated for 18 hours (64 percent), and no differences (P>0.05) among remainder treatments were observed. The polyspermic rate (P<0.05) was higher for higher sperm concentration and incubation period. Bull A showed the lowest (P<0.05) polyspermy rate. Bulls A and C showed higher (P<0.05) cleavage than bull B. Incubation period, sperm concentration, and interaction of these two factors influenced penetration and polyspermy rates, without any effect on monospermic fecundation rates and embryos production.

Secreção de interferon-tau em embriões bovinos produzidos in vitro frescos e congelados / Interferon tau secretion in cattle embryos in vitro fertilized before and after cryopreservation

Avaliou-se a interferência da criopreservação sobre a secreção de interferon-tau (IFN-t) por embriões bovinos produzidos in vitro. Usaram-se dois grupos de tratamentos: I) constituído por embriões não criopreservados (fresco) e II) embriões criopreservados. Os embriões, após atingirem a fase de blastocisto (fresco ou imediatamente após o descongelamento dos criopreservados), continuaram a ser cultivados individualmente por mais sete dias. Do meio de cultivo em que se mantiveram os blastocistos retiraram-se alíquotas com três e sete dias do início do cultivo, para a avaliação da secreção de IFN-t pelos embriões cultivados. Os embriões congelados secretaram menos IFN-t do que aqueles não criopreservados (P<0,05), e com sete dias houve maior secreção do interferon do que com três dias (P<0,05). A criopreservação prejudicou a produção de IFN-t pelo trofoblasto e pode comprometer o reconhecimento materno da gestação e o desenvolvimento do embrião pós-descongelamento.

The effect of cryopreservation in IFN-tau, from bovine embryos produced in vitro was evaluated. Two treated groups (G1= fresh bovine embryos, n=59 and G2= freezed embryos, n=84) were used to study the effect of cryopreservation on IFN-tau secretion. After reaching the blastocyst phase, the embryos were kept on individual culture for additional period of 7 days. On days 3 and 7 after the beginning of embryos cultivation, samples of the media culture were taken for IFN-tau secretion titration. Oocysts taken from follicles ranging from 3 to 5mm in diameter were obtained from ovaries of females at slaughterhouse. The embryos were frozen, after being dehydrated with ethylene glycol (1.8m), conditioned on 0.5ml palletes and frozen. Frozen embryos secreted lower IFN-tau than fresh embryos (P<0.05). At day 7 it was registered higher IFN-tau secretion from trophoblast than at day 3 (P<0.05). The increasing of IFN-tau secretion was observed when the blastocyst began to longed and it was directly related to the embryos development. The synthesis of IFN-tau is related to the capability of development of the blastocyst. Cryopreservation is a method that affects the maternal recognition of pregnancy and the post-freezing embryo development.

Secreção de interferon-tau em embriões bovinos produzidos in vitro frescos e congelados / Interferon tau secretion in cattle embryos in vitro fertilized before and after cryopreservation

Avaliou-se a interferência da criopreservação sobre a secreção de interferon-tau (IFN-t) por embriões bovinos produzidos in vitro. Usaram-se dois grupos de tratamentos: I) constituído por embriões não criopreservados (fresco) e II) embriões criopreservados. Os embriões, após atingirem a fase de blastocisto (fresco ou imediatamente após o descongelamento dos criopreservados), continuaram a ser cultivados individualmente por mais sete dias. Do meio de cultivo em que se mantiveram os blastocistos retiraram-se alíquotas com três e sete dias do início do cultivo, para a avaliação da secreção de IFN-t pelos embriões cultivados. Os embriões congelados secretaram menos IFN-t do que aqueles não criopreservados(P<0,05), e com sete dias houve maior secreção do interferon do que com três dias (P<0,05). A criopreservação prejudicou a produção de IFN-t pelo trofoblasto e pode comprometer o reconhecimento materno da gestação e o desenvolvimento do embrião pós-descongelamento.

Developmental competence of oocytes from prepubertal Bos indicus crossbred cattle.

The aim of the present study was to evaluate the effect of age on embryogenic competence of oocytes recovered from Bos indicus crossbred calves and heifers. Cumulus-oocyte complexes (COCs) were collected from 4- to 7-month-old calves (experiment 1) and from 9- to 14-month-old heifers (experiment 2) during processing at an abattoir. In both experiments cow COCs were used as control. COCs were in vitro matured and fertilized, and the presumptive zygotes co-cultured with cumulus cells until 224 h post insemination (hpi). In experiment 1, the development rate during the first 68-72 hpi was similar (P > 0.05) between embryos derived from calves and cows. Fewer embryos from calves developed to the blastocyst stage, resulting in a lesser blastocyst production as well as lesser hatching rate (P < 0.05). The embryo development after blastocyst stage was, nevertheless, similar (P > 0.05) between blastocysts derived from calves and cows, suggesting that the development after blastocoele formation is not compromised in embryos derived from calves. In experiment 2, there were no differences (P > 0.05) on cleavage, blastocyst and hatching rates between embryos derived from prepubertal heifers and cows. The rate of blastocyst development until hatching was also similar (P > 0.05). These results indicate that oocytes from 9- to 14-month-old B. indicus crossbred heifers have the same developmental competence as oocytes derived from cows, while ocytes derived from 4- to 7-month-old B. indicus crossbred calves are less competent in developing to the blastocyst stage in vitro. It suggests that oocyte competence in B. indicus crossbred cattle is achieved around 9-14 months of age.

Avaliação da capacitação espermática in vitro pela reação acrossômica e viabilidade, em sêmen de touros Guzerá

O objetivo deste trabalho foi avaliar a capacitação espermática pela reação acrossômica e viabilidade espermática de sêmende touros Guzerá. Utilizou-se sêmen de diferentes touros adquiridos de centrais de inseminação artificial. Após o descongelamento,o sêmen foi incubado inicialmente com 0 (T1) e 10 mg/ml (T2) de heparina por quatro horas a 39ºC e 95% deumidade, e posteriormente com lisofosfatidilcolina por mais 15 minutos, para indução da reação acrossômica. Antes e apóso período de incubação foram feitas lâminas para a análise da viabilidade espermática e reação acrossômica. Verificou-seque o tratamento com heparina aumentou a taxa de espermatozóides com reação acrossômica (p 0,05), e que houve diferençasna fertilidade entre os touros após a capacitação espermática. Conclui-se que o teste de reação acrossômica e viabilidadeespermática pode ser utilizado para avaliação da capacitação espermática in vitro de touros da raça Guzerá.

Efeito de diferentes meios de cultivo no desenvolvimento e proporção do sexo de embriões bovinos produzidos in vitro / Effect of different culture media on development and sex ratio of bovine embryos fertilized in vitro

Avaliou-se o efeito da suplementação de meios de cultivo sobre o desenvolvimento e proporção do sexo de embriões bovinos fertilizados in vitro. Complexos cumulus-oócitos obtidos de ovários de matadouro foram maturados e fertilizados in vitro. Os zigotos (n= 484) foram distribuídos aleatoriamente em meio CR2aa, contendo soro fetal bovino (SFB) (T1), albumina sérica bovina (BSA) (T2) ou BSA mais insulina:transferrina:selênio e vitaminas (BSA+) (T3), no cultivo embrionário in vitro, a uma atmosfera de 5 por cento CO2 a 38,8ºC em ar. A taxa de clivagem foi observada 72-76 horas pós-fertilização (PF) e a taxa de blastocistos com sete e oito dias PF. Os blastocistos (n= 63) foram sexados pela técnica de reação em cadeia de polimerase. A taxa de clivagem em T2 foi maior (P<0,05) do que em T1 e T3. A taxa de blastocistos foi similar (P>0,05) entre T2 e T3, porém menor (P<0,01) do que em T1. A proporção do sexo dos embriões não diferiu (P>0,05) entre os tratamentos. O T1 influenciou o desenvolvimento de blastocistos, mas não teve efeito sobre a proporção do sexo.

Desenvolvimento pós-fecundaçäo de oócitos bovinos pré-maturados em fluido folicular / Post-fertilization development of bovine oocytes pre-matured in follicular fluid

Estudou-se o efeito da pré-maturaçäo em fluido folicular bovino (FFb) sobre o potencial de desenvolvimento de ovócitos bovinos imaturos. Complexo cumulus- ovócitos (CCO) e FFb foram obtidos de ovários coletados em matadouro. O FFb foi inativado e os CCOs imaturos distribuídos em quatro tratamentos: (T1) 70 por cento de FFb em Talp Hepes, (T2) 100 por cento de FFb, (T3) 100 por cento de Talp Hepes, e (T4) controle. Em T1, T2 e T3 os CCOs foram pré - maturados por cinco horas a 37ºC em ar e posteriormente maturados in vitro. Em T4 a maturaçäo ocorreu logo após a aspiraçäo. Depois de fecundados in vitro, os ovócitos foram co-cultivados com células do cumulus por 10 dias. Avaliaram-se as taxas de clivagem, de produçäo de blastocistos no sétimo e oitavo dias pós- fecundaçäo (PF), de produçäo total e de blastocistos eclodidos no oitavo e nono dias PF. Calcularam-se as taxas de blastocistos no sétimo e oitavo dia e de blastocistos eclodidos em funçäo do total de blastocistos produzidos. As taxas de clivagem, de produçäo total e de blastocistos eclodidos näo diferiram entre os tratamentos (P>0,05), entretanto a produçäo de blastocistos no sétimo dia foi menor nos tratamentos com FFb e Talp Hepes (P<0,05). Concluiu-se que FFb e Talp Hepes na pré-maturaçäo por cinco horas atrasam o desenvolvimento embrionário sem comprometer a taxa de produçäo total de embriöes ou sua viabilidade.

Efeito da pré-estimulaçäo ovariana sobre características de oócitos após punçäo folicular em bovinos / Effect of ovarian pre-stimulation on the ultrasound-guided follicular puncture

Avaliaram-se os efeitos da pré-estimulaçäo ovariana com FSH e da imunizaçäo ativa contra inibina suína sobre o número e classificaçäo morfológica de oócitos recuperados por punçäo folicular. Catorze vacas da raça Gir, pluríparas e näo-lactantes, foram distribuídas em: TI - submetidas a pré-estimulaçäo com 250 UI de FSH (n=4), TII - submetidas a imunizaçäo ativa contra inibina suína (n=4) e TIII - näo tratadas (n=6; controle). Todos os animais tiveram seus folículos com diâmetro superior a três milímetros aspirados uma vez por semana, durante 10 semanas consecutivas. O TI apresentou aumento na populaçäo folicular total (P<0,05) e no número de folículos puncionados (P<0,001), porém a taxa de recuperaçäo foi inferior à dos tratamentos II e III (68,8 por cento vs. 78,4 por cento e 76,3 por cento, respectivamente; P<0,01). O TII näo afetou as principais características ovarianas, exceto pelo aumento no número de folículos de tamanho médio (P<0,01). O TI produziu maior percentual de oócitos viáveis (77,2 por cento vs. 69,8 por cento; P<0,05) e de oócitos de Grau I (19,8 por cento vs. 11,6 por cento; P<0,001) do que o TIII. Os tratamentos I e II reduziram o percentual de oócitos degenerados (16,4 por cento e 16,8 por cento vs. 22,3 por cento; P<0,05). A pré-estimulaçäo ovariana com FSH demonstrou ser a alternativa mais consistente para aumentar a qualidade dos oócitos recuperados de vacas zebuínas

Taurina no desenvolvimento de embriões bovinos fecundados in vitro

The effect of different taurine concentrations on bovine embryo development in medium supplemented with different serum sources was studied. In the first experiment, in vitro fertilized zygotes (n=440) were divided into treatments with 0, 3, 7 or 14 mM of taurine in culture medium supplemented with 10% of fetal calf serum (FCS) and 3g/l of bovine serum albumin (BSA). In the second experiment, zygotes (n=940) were divided into treatments with 0, 3 or 14 mM of taurine in cultured medium supplemented with 10% of FCS or 3g/l of BSA. In the third experiment, zygotes (n=191) were divided into treatments with 0 or 3 mM of taurine in culture medium without serum source, even so supplemented with 3g/l of polyvinyl alcohol. In the first and second experiments no differences (P>0.05) in cleavage rate, blastocyst production and cells number among the concentrations of taurine were observed. In the third experiment, taurine increased (P 0.05) cleavage rate (68.5% vs. 16.9%) and blastocysts production (8.3% vs. 0%). The culture of zygotes in medium supplemented with FCS produced more (P 0.01) blastocyst in the seventh (25.6% vs. 6.7%) and eighth (30.8% vs. 13.9%) day post-fertilization and total cells number/blastocysts (104.8± 2.63 vs. 84.7± 3.86) than in medium with BSA, despite lower (P 0.01) cleavage rate (58.1% vs. 71.3%). In conclusion, taurine only has a beneficial effect in the embryo development in culture medium in the absence of FCS and BSA. Fetal calf serum decreases cleavage rate, however, it improves the embryo development after the early cleavage.

O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito de diferentes concentrações de taurina no desenvolvimento de embriões bovinos fecundados in vitro em meio de cultivo com diferentes fontes de soro. No experimento 1, zigotos (n=440) fecundados in vitro foram distribuídos aleatoriamente nos tratamentos com 0, 3, 7 ou 14 mM de taurina em meio de cultivo acrescido de 10% de soro fetal bovino (SFB) e 3g/l de albumina sérica bovina (BSA). No experimento 2, os zigotos (n=940) foram divididos nos tratamentos com 0, 3 ou 14 mM de taurina em meio acrescido de 10% de SFB ou 3g/l de BSA. No experimento 3, os zigotos (n=191) foram divididos nos tratamentos com 0 ou 3 mM de taurina em meio de cultivo sem fonte de soro, porém adicionado de 3 g/l de álcool polivinil. Nos experimentos 1 e 2 não se observou diferença (P>0,05) na taxa de clivagem, na produção de blastocistos e no número de células entre as concentrações de taurina avaliadas. No experimento 3 encontraram-se maior (P 0,05) taxa de clivagem (68,5% vs. 16,9%) e produção de blastocistos (8,3% vs. 0%) na presença de taurina. O cultivo de zigotos em meio adicionado de SFB produziu maior (P 0,01) taxa de blastocistos no sétimo (25,6% vs. 6,7%) e oitavo (30,8% vs. 13,9%) dia pós-fecundação e número de células/blastocistos (104,8± 2,63 vs. 84,7± 3,86) do que no cultivo com BSA, apesar de menor (P 0,01) taxa de clivagem (58,1% vs. 71,3%). Conclui-se que o efeito benéfico da taurina no desenvolvimento embrionário somente é observado na ausência de SFB e BSA. O SFB produz menor taxa de clivagem mas melhora o desenvolvimento embrionário após as primeiras divisões celulares.

Taurina no desenvolvimento de embriöes bovinos fecundados in vitro / Taurine on the development of in vitro fertilized bovine embryos

O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito de diferentes concentraçöes de taurina no desenvolvimento de embriöes bovinos fecundados in vitro em meio de cultivo com diferentes fontes de soro. No experimento 1, zigotos (n=440) fecundados in vitro foram distribuídos aleatoriamente nos tratamentos com 0, 3, 7 ou 14 mM de taurina em meio de cultivo acrescido de 10 por cento de soro fetal bovino (SFB) e 3g/l de albumina sérica bovina (BSA). No experimento 2, os zigotos (n=940) foram divididos nos tratamentos com 0, 3 ou 14 mM de taurina em meio acrescido de 10 por cento de SFB ou 3g/l de BSA. No experimento 3, os zigotos (n=191) foram divididos nos tratamentos com 0 ou 3 mM de taurina em meio de cultivo sem fonte de soro, porém adicionado de 3 g/l de álcool polivinil. Nos experimentos 1 e 2 näo se observou diferença (P>0,05) na taxa de clivagem, na produçäo de blastocistos e no número de células entre as concentraçöes de taurina avaliadas. No experimento 3 encontraram-se maior (P<0,05) taxa de clivagem (68,5 por cento vs. 16,9 por cento) e produçäo de blastocistos (8,3 por cento vs. 0 por cento) na presença de taurina. O cultivo de zigotos em meio adicionado de SFB produziu maior (P<0,01) taxa de blastocistos no sétimo (25,6 por cento vs. 6,7 por cento) e oitavo (30,8 por cento vs. 13,9 por cento) dia pós-fecundaçäo e número de células/blastocistos (104,8± 2,63 vs. 84,7± 3,86) do que no cultivo com BSA, apesar de menor (P<0,01) taxa de clivagem (58,1 por cento vs. 71,3 por cento). Conclui-se que o efeito benéfico da taurina no desenvolvimento embrionário somente é observado na ausência de SFB e BSA. O SFB produz menor taxa de clivagem mas melhora o desenvolvimento embrionário após as primeiras divisöes celulares

Fertilidade de novilhas após aborto induzido com cloprostenol / Fertility of heifers after abortion induced by cloprostenol

O efeito da interrupçäo da gestaçäo sobre a fertilidade foi avaliada em 50 novilhas da raça Holandesa, gestantes de fetos do sexo masculino entre 55 e 90 dias de idade. O aborto foi induzido pela administraçäo de cloprostenol sódico, após o diagnóstico do sexo fetal. Os animais foram inseminados no segundo estro normal após o aborto. A interrupçäo da gestaçäo ocorreu em 86 por cento dos animais tratados e a via de administraçäo, intramuscular ou intravulvar, näo afetou a taxa de aborto. Os intervalos do aborto à primeira inseminaçäo e do aborto à concepçäo foram de 38,94± 4,96 e 47,32± 15,89 dias, respectivamente. Näo houve diferença no número médio de serviços por concepçäo pré e pós-interrupçäo da gestaçäo (1,22 vs. 1,34; P>0,05). Conclui-se que a induçäo do aborto no terço inicial da gestaçäo em novilhas näo compromete a fertilidade dos animais

Nascimento de bezerra gerada com auxílio das técnicas de punçäo folicular e fertilizaçäo in vitro no Estado de Minas Gerais / Birth of a calf produced by follicular puncture and in vitro fertilization techniques in Minas Gerais State, Brazil

Ultrasound-assisted follicular puncture is a technique of oocyte recovery for in vitro fertilization and production of embryos. In order to adjust the methodology, a field trial was performed using lactating Holstein cows (n=8) as oocyte donors. Punctures were done with an ultrasound device equipped with a 7.5 MHz intravaginal sectorial probe. Oocytes recovered were matured, fertilized and cultured in vitro, and embryos produced transferred to recipients heifers. On July, 2000, the first calf produced by these techniques in Minas Gerais State, Brazil, was born

Efeito de sistema de cultivo, célula somática e soro em co-cultura sobre o desenvolvimento de embriöes bovinos fecundados in vitro / Effects of culture system, somatic cells and serum in co-culture on the development of in vitro fertilized bovine embryos

O objetivo deste experimento foi o de avaliar o efeito de sistemas de cultivo e de diferentes células somáticas e soro bovino na co-cultura sobre a produçäo de embriöes bovinos fecundados in vitro. No experimento um avaliou-se o efeito do sistema de co-cultura com células da tuba uterina e do sistema "definido". No experimento dois utilizaram-se células da granulosa ou da tuba uterina para a co-cultura em meio CRlaa (Charles Rosenkrans). No experimento três utilizou-se soro de vaca em cio (SVC) ou soro fetal bovino (SFB), ambos em co-cultura com células da granulosa em CR1aa. Os ovócitos utilizados foram obtidos de ovários colhidos em matadouro e maturados in vitro em meio 199 com soro de vaca em cio e FSH por 24h. Após a maturaçäo, os ovócitos foram fecundados in vitro por 22h e posteriormente divididos aleatoriamente nos tratamentos. Avaliaram-se a taxa de clivagem no dia três do cultivo, a produçäo de blastocistos nos dias sete e oito, e de blastocistos eclodidos nos dias nove e dez. Näo houve diferença entre os sistemas em co-cultura e "definido" quanto à taxa de clivagem (80,7 por cento e 75,4 por cento) e de produçäo de blastocisto (19,4 por cento e 17,7 por cento). Entretanto, a taxa de blastocistos eclodidos foi superior para o sistema em co-cultura (37,5 por cento) quando comparado com o sistema "definido" (8,7 por cento). O cultivo embrionário em células da tuba uterina ou da granulosa resultaram em taxas de clivagem, produçäo de blastocisto e blastocistos eclodidos semelhantes entre si (65,5 por cento e 66,7 por cento de clivagem, 11,6 por cento e 13,7 por cento de blastocistos e 23, 1 por cento e 50,0 por cento de blastocistos eclodidos; P>0,05), bem como o cultivo com SFB ou SVC (63,9 por cento e 70,2 por cento de clivagem, 14,3 por cento e 8,7 por cento de blastocisto e 41,2 por cento e 33,3 por cento de blastocistos eclodidos; P>0,05). Conclui-se que o sistema de cultivo "definido" pode ser utilizado para estudos com cultivo de embriöes in vitro, no entanto, os resultados quanto à taxa de eclosäo ainda säo inferiores ao sistema em co-cultura. As células da granulosa e da tuba uterina possuem efeito semelhante sobre o desenvolvimento embrionário, assim como o soro de vaca em cio e o soro fetal bovino, quando em co-cultura

Fecundaçäo in vitro com sêmen de bovinos da raça Gir / In vitro fertilization with bovine semen in Gyr breed

Estudaram-se os efeitos da concentraçäo espermática e do tempo de incubaçäo do sêmen com ovócitos, durante a fecundaçäo in vitro, sobre as taxas de penetraçäo espermática, de fecundaçäo monoespermática e de clivagem, utilizando-se sêmen de touros da raça Gir. Ovócitos (n=817) maturados in vitro foram distribuídos em tratamentos visando à fecundaçäo in vitro (FIV), em um delineamento fatorial 2x2x2, com duas concentraçöes espermáticas (2 e 4 x 10 elevada a sexta potência espermatozóides/ml), dois períodos de incubaçäo (l2 e l8h) e dois touros (A e B). Espermatozóides viáveis foram obtidos pela técnica de swin-up. A FIV foi realizada em meio fert-talp com heparina, em incubadora com 5 por cento de CO2 em ar atmosférico e 95 por cento de umidade, a 39§C. Após inseminaçäo, 359 ovócitos foram fixados e corados para determinaçäo das taxas de penetraçäo e poliespermia. O restante foi co-cultivado com células da tuba uterina e TCM-199 por 72h, avaliando-se a clivagem. As taxas de penetraçäo, fecundaçäo monoespermática e clivagem näo foram influenciadas (P>0,05) pela concentraçäo espermática e pelo período de incubaçäo. O touro B produziu maiores taxas (P<0,05) de penetraçäo e de clivagem (83,3 e 81,0 por cento, respectivamente) do que o touro A (66,5 e 64,0 por cento). Houve tendência do touro B apresentar maior taxa de polispermia (P=0,067) do que o touro A (l6,4 e 6,2 por cento, respectivamente). As interaçöes entre tratamentos näo foram significativas (P>0,05). O efeito touro sobre a capacidade de fecundaçäo dos espermatozóides deve ser considerado quando da fecundaçäo in vitro